建立高重組蛋白表達之酵母菌Pichia Pastoris系統

利用真核表現系統來製造生產重組蛋白質已被廣泛應用於醫藥、食品與化學工業等方面，嗜甲醇酵母菌Pichia pastoris是目前最常被用來大量表達重組蛋白質的真核表達系統，但由於不同外源基因在P. pastoris中經常會有不同的重組蛋白質表達量，為了要建立一個能穩定且大量表達重組蛋白質的系統，有許多研究報告提出增加外源基因在P. pastoris表達量的方法。本研究採用操縱細胞整體轉錄作用（global transcription machinery engineering）的技術，以提升Candida rugosa重組脂肪酶在P. pastoris的表達量，藉由隨機突變P. pastoris的重要轉錄因子SPT15（一種TATA-binding protein），達到改變P. pastoris的轉錄體（transcriptome），進而影響Candida rugosa重組脂肪酶（lipase）的表達量。利用高通量（high-throughput）脂肪酶活性測定法，挑出具有高脂肪酶表達量的突變株。目前已從464個突變株當中，篩選出16個突變株其脂肪酶表達量高於野生型1.5倍以上，其中最高的一株表達量為野生型的2.3倍。此結果顯示操縱P. pastoris整體轉錄作用可以提升外源重組蛋白在P. pastoris的表達量。