第一型黏多醣儲積症:突變及多型性分析

李 桂楨(Guey-Jen Lee-Chen), 程 幼青(Yow-Ching Cherng), 賴 秋雁(Chiou-Yen Lai), 劉 美能(Mei-Neng Liu), 胡 務亮(Wuh-Liang Hwu), 王 作仁(Tso-Ren Wang)

Research output: Contribution to journalArticle

Abstract

本實驗在以分子生物的技術,進行第一型黏多醣儲積症(MPS I)的基因突變及多型性分析。首先由正常人及患者的皮膚纖維母細胞萃取出poly(A)^+ RNA作為模板,用特殊序列的寡核甘酸引子及鼠類白血病毒(Mo-MLV)反轉錄酵素,合成和mRNA序列互補的第一鏈cDNA,再用聚合酵素鏈反應(PCR),將α-L-iduronidase(IDUA)基因,以部份重疊的二片段選殖出來。置入pGEM-T載體後,將篩選出的純系(clone)進行DNA序列分析,將比較正常人及患者的基因序列,來了解患者的分子病因。患者W3為異型合子,在對偶基因1上,轉錄起始密碼ATG之G突變為A,而且第2表現子的47個胺基酸片段,發生在同一解讀架構的缺失。南方吸漬分析顯示患者基因體DNA上,一個包含第二表現子的4.7 Kb片段發生了缺失;在對偶基因2上,第193個胺基酸呈現多型性的變化,由蛋胺酸(Met)轉變為異白胺酸(Ile),而且第8表現子5端的19個胺基酸片段,也發生在同一解讀架構的缺失。南方吸漬分析則顯示患者的IDUA基因,並無相對應的缺失。相反的,患者W2的IDUA cDNA,則含有數種改變胺基酸的突變和多型性的變化,包括同型合子的R105Q、A361T、T364M、V454I和異型合子的H240L、F495L、G549E。北方吸漬分析顯示,患者的纖維母細胞中,可偵測到少量的2.3 Kb及2.0 Kb mRNA及大量的6.4 Kb和3.9 Kb processed pre-mRNA。應用PCR及限制片段長度多型性(RFLP)或不同數目重覆單位(VNTR)的方法,我們對正常人及第一型黏多醣儲積症患者,進行KpnI及VNTR多型性的對偶基因(allele)及單套型(haplotype)頻率的分析。此多型性的研究,或可作為臨床上MPS I檢視的參考。
Original languageChinese
Pages (from-to)1-10
Number of pages10
Journal師大生物學報
Volume30
Issue number1
DOIs
Publication statusPublished - 1995

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李桂楨(Guey-Jen L-C, 程幼青(Yow-Ching C, 賴秋雁(Chiou-Yen L, 劉美能(Mei-Neng L, 胡務亮(Wuh-Liang H, & 王作仁(Tso-Ren W (1995). 第一型黏多醣儲積症:突變及多型性分析. 師大生物學報, 30(1), 1-10. https://doi.org/10.29812/BBNTNU.199506.0001