第一型黏多醣儲積症：突變及多型性分析

本實驗在以分子生物的技術，進行第一型黏多醣儲積症（MPS I）的基因突變及多型性分析。首先由正常人及患者的皮膚纖維母細胞萃取出poly(A)^+ RNA作為模板，用特殊序列的寡核甘酸引子及鼠類白血病毒（Mo-MLV）反轉錄酵素，合成和mRNA序列互補的第一鏈cDNA，再用聚合酵素鏈反應（PCR），將α-L-iduronidase（IDUA）基因，以部份重疊的二片段選殖出來。置入pGEM-T載體後，將篩選出的純系（clone）進行DNA序列分析，將比較正常人及患者的基因序列，來了解患者的分子病因。患者W3為異型合子，在對偶基因1上，轉錄起始密碼ATG之G突變為A，而且第2表現子的47個胺基酸片段，發生在同一解讀架構的缺失。南方吸漬分析顯示患者基因體DNA上，一個包含第二表現子的4.7 Kb片段發生了缺失；在對偶基因2上，第193個胺基酸呈現多型性的變化，由蛋胺酸（Met）轉變為異白胺酸（Ile），而且第8表現子5端的19個胺基酸片段，也發生在同一解讀架構的缺失。南方吸漬分析則顯示患者的IDUA基因，並無相對應的缺失。相反的，患者W2的IDUA cDNA，則含有數種改變胺基酸的突變和多型性的變化，包括同型合子的R105Q、A361T、T364M、V454I和異型合子的H240L、F495L、G549E。北方吸漬分析顯示，患者的纖維母細胞中，可偵測到少量的2.3 Kb及2.0 Kb mRNA及大量的6.4 Kb和3.9 Kb processed pre-mRNA。應用PCR及限制片段長度多型性（RFLP）或不同數目重覆單位（VNTR）的方法，我們對正常人及第一型黏多醣儲積症患者，進行KpnI及VNTR多型性的對偶基因（allele）及單套型（haplotype）頻率的分析。此多型性的研究，或可作為臨床上MPS I檢視的參考。