反轉錄病毒起動子捕捉載體之製造

王 秀觀(Hsiu-Kuan Wang), 李 桂楨(Guey-Jen Lee-Chen), 張 雯

Research output: Contribution to journalArticle

Abstract

本實驗之目的,在改良反轉錄病毒起動子捕捉載體,以期更有效率的捕捉細胞基因的起動子。U3 β-geo/supF質體3端不帶有促進子的LTR的U3區插入了在同一解讀架構上的β-galactosidase(β-gal)和neomycin phosphotransferase(neo)的雜合標識基因(簡稱β-geo)。我們將U3 β-geo/supF質體3端U3區之起動子序列切除,得到ΔU3 β-geo/supF質體,以去除起始於5端LTR而終止於3端LTR的轉錄,進而提高起動子捕捉的效率。此外,我們以pBR322質體之複製起源點(ori)及β-lactamase基因(amp)置換ΔU3 β-geo/supF質體之supF基因,得到ΔU3 β-geo/ori-amp質體,此法有利於病毒插入處鄰近細胞序列的選殖。將各重組質體轉移入φ2細胞,得到重組病毒製造細胞株,其病毒價數,可籍感染NIH 3T3細胞來測定。U3 β-geo/supF重組病毒感染之細胞生長良好、緻密,有較多大型細胞株形成。切除U3區之起動子的重組病毒感染之細胞則生長緩慢、不緻密,大型細胞株很少。U3 β-geo/supF重組病毒價數與其他已知之鼠類白血病毒價數相近,故推論在LTR上插入3.9-kb β-geo基因並不會影響病毒的複製、插入或包裝。ΔU3 β-geo/ori-amp重組病毒價數則降低50%。故推論pBR322質體之ori-amp基因上的有毒序列可能會影響病毒的複製或插入,或者ori-amp基因之置入,使病毒增長2.1 Kb,可能造成病毒包裝的困難而導致病毒價數的降低。
Original languageChinese
Pages (from-to)23-29
Number of pages7
Journal師大生物學報
Volume30
Issue number1
DOIs
Publication statusPublished - 1995

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